Pharmazeutische Proteine – Leistungsangebot und Ausstattung

Leistungsangebot

Klonierungsstrategien

  • Design von Expresions-Plasmiden, artspezifische Codon-Optimierung

Proteinexpression in E. coli

  • Batch- und Fed-batch-Fermentationen, Hochzelldichtefermentationen
  • Isolierung von Einschlusskörpern und Rückfaltung von Proteinen
  • Ertragsstarke lösliche Proteinreinigung

Aufreinigung von markierten Proteinen

  • Einstufige Aufreinigungsmethode mit Tags
  • Tag-Entfernung mit speziellen Enzymen

Weitere Aufreinigung von Proteinen

  • Chromatographie: Ionenaustausch, Größenauschlusschromatographie, hydrophobe Austauschchromatographie, IMAC
  • Farbstoffaffinitätschromatographie durch Immobilisierung von Proteinen und Peptiden
  • Rückfaltung von Protein

Proteinexpression in Säugetier-Zelllinien

  • Stabile Zelllinien-Produktion

Proteincharakterisierung

  • Gelelektrophorese (SDS-PAGE, Native, IEF, 2-D) und Färbung mittels Coomassieblau oder Silbernitrat
  • Bestimmung von Proteinkonzentration
  • Westernblotting
  • Messen des Absorptionsspektrums
  • N-terminale Sequenzierung
  • Peptide Mapping
  • Massenspektrometrie
  • Enzymaktivitätsmessungen

Ausstattung

Für die Aufarbeitung nach der Fermentation (Downstream Processing) von (Pharma)-Proteinen stehen als Ausstattung zur Verfügung:

Isolierung der Biomasse

  • Diskontinuierliche Zentrifugen, Durchlaufzentrifugen
  • Mikrofiltration

Zellaufschluss

  • Hochdruckhomogenisator
  • Kugelmühlen
  • Ultraschallaufschluss

Klärung der Extrakte (Überstände) und Konditionierung

  • Ultrazentifuge
  • Mikrofiltration
  • Proteinfällung
  • Wässrige Zweiphasensysteme

Proteinreinigung

  • Mehrere Systeme zur flüssigkeitschromatographischen Reinigung von Proteinen (ÄKTApurifier, ÄKTAexplorer, Smart-system)

Charakterisierung

  • SDS-PAGE, IEF, 2-D-Elektrophorese, Western Blot
  • HPLC
  • Edman-Sequenzierung
  • Maldi-Tof-MS/MS
  • LC-MS/MS